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Perfil electroforético de celulasas en FSS y FS

Se determinó el patrón electroforético de formación de enzimas celulolíticas de la cepa mutante de Trichoderma reesei LM-UC4 en relación a los sistemas de cultivo: fermentación sumergida y fermentación en sustrato sólido.
Para la producción de enzimas celulolíticas se realizaron fermentaciones en sustrato sólido (FSS) y sumergida (FS) empleando bagacillo como fuente carbonada y torta de soya como fuente nitrogenada.
Las enzimas obtenidas en la fermentación se sometieron a electroforesis vertical en geles de poliacrilamida con un gradiente de concentración de 3-15% y se analizaron mediante zimogramas.
Con respecto a los zimogramas, en agar celulosa, para FSS se identificaron dos zonas de hidrólisis mayores y cuatro zonas de hidrólisis menores. Las dos zonas de hidrólisis mayores se identificaron como celobiohidrolasas (CBHI y CBHII) y las zonas menores se identificaron como endoglucanasas. En FS, se identificaron cuatro zonas de hidrólisis, de las cuales dos zonas corresponderían a complejos que muestran actividad exo-endo debido a que presentaron alta actividad hacia celulosa ablandada y carboximetilcelulosa, y que las otras dos zonas de hidrólisis que aparecieron al final de la fermentación fueron producto de la proteólisis parcial de las dos zonas anteriores.
En agar carboximetilcelulosa se determinó en FSS cuatro zonas de hidrólisis con actividad endoglucanasa y a las 120 horas se observaron seis zonas de hidrólisis. En FS se observó a las 24 horas siete zonas de hidrólisis con actividad endoglucanasa y a partir de las 48 horas el número de zonas de hidrólisis se incrementó a nueve.
Para la actividad ß-glucosidasa, se observó en FSS una forma de ß-glucosidasa (excepto a las 24 horas) y en FS se observó tres formas de ß-glucosidasa.
En agar xilano, el zimograma obtenido para FSS es similar al zimograma para endoglucanasas sugiriendo la posible formación de complejos enzimáticos que presentarían actividades celulasas, endoglucanasas, ß-glucosidasas y xilanasas. En FS, el zimograma para xilanasas es similar al zimograma de endoglucanasas y que probablemente se tratarían de complejos enzimáticos o de endoglucanasas con actividad de sustrato inespecíficas.
Los zimogramas obtenidos en condiciones denaturantes tanto en FSS como en FS presentaron el mismo patrón de formación, es decir, la condición denaturante a la que fueron sometidas las enzimas no afectó los posibles complejos enzimáticos que estarían formando las enzimas celulasas.
En lo que respecta a proteínas totales se determinó que en FSS se encontraron 19 bandas de proteínas de las cuales sólo ocho presentaron actividad celulasas, cuyos pesos moleculares varían entre los 630,000 y 190,000 daltons. En FS se encontraron 20 bandas de proteínas totales de las cuales sólo 12 presentaron actividad celulasa, cuyos pesos moleculares varían entre los 600,000 y 39,000 daltons.
Como conclusión se puede afirmar que las enzimas celulasas de Trichoderma reesei LM-UC4 producidas sobre bagacillo como fuente carbonada y torta de soya como fuente nitrogenada están formando en algunos casos complejos enzimáticos y en otros casos se tratarían de enzimas con actividad inespecífica de sustrato.

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